Cálculo de las constantes cinéticas del proceso de termo inactivación disociativa de la fosfatasa Acida

Resumen

Introducción: La fosfatasa acida es una enzima oligomérica compuesta por dos subunidades  y  la cinética de termo inactivación de las enzimas diméricas, se realiza en dos etapas y corresponde al mecanismo cinético secuencial de termo inactivación disociativa  de un dímero activo, que se disocia reversiblemente en subunidades inactivas.

Objetivo: Estudiar el proceso de termo inactivación de la fosfatasa acida a diferentes temperaturas y un pH óptimo de la enzima

Materiales y métodos: Se utilizó un preparado de fosfatasa acida del germen de trigo de la firma Sigma, USA. El sustrato utilizado es el p-nitrofenilfosfato de sodio hexahidratado de la firma Alfa Aesar A Jhonson Mathey Company. La actividad de la fosfatasa acida se determinó por la velocidad inicial de la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato de sodio. La cantidad de p-nitrofenol formado se determinó en el espectrofotómetro  Genesys 20 a 405 nm. La termo inactivación se llevó a cabo en el buffer de acetato 0.1 M a un pH de 5,5 y valores de temperatura 50⁰C, 55⁰C ,60⁰C y 65⁰C

Resultados: Se estudió el esquema cinético de termo inactivación de la enzima dimérica -fosfatasa acida que incluye la disociación reversible del dímero activo en monómeros inactivos y la posterior denaturación de los monómeros. Se calculan los parámetros cinéticos característicos de la termo inactivación de una enzima dimérica  k_1,k_-1, k_d, K_dis  y k_aso

 Conclusiones:

1.-Las curvas cinéticas en coordenadas semilogarítmicas de una ecuación de primer orden tienen un punto de quiebre.

2.- Los valores de k₁ correspondientes a la constante de velocidad de disociación de la fosfatasa ácida que determinan la estructura del dímero, aumentan con la temperatura.

3.-La energía de activación de la disociación del dímero a monómero de la fosfatasa acida es de 23,22 KJ/Mol