Análisis Informático de Cinética Enzimática por medio de macros de MsExcel

Resumen

Mediante la automatización de una hoja de cálculo de MsExcel administrada a través de macros escritos en lenguaje VBA, se diseño una rutina que permite, a partir de ensayos de reacciones fermentativas, evaluar la velocidad de la reacción en un tiempo y a diferentes concentraciones tanto del sustrato como del inhibidor.  Inicialmente se evaluó la tendencia logarítmica de los datos al graficar la velocidad contra la concentración del sustrato como un criterio inicial para la aceptación del modelo de Michaelis-Menten. Cuando los datos cumplieron con este supuesto, se procedió a su transformación, con el fin de linealizarlos y graficarlos según los modelos de Lineweaver-Burk, Eadie-Hofstee y las coordenadas de Woolf. Para todas las gráficas se aplico a cada serie correspondiente a una concentración del inhibidor, análisis de regresión lineal simple, y a partir del modelo matemático de cada caso, se obtuvieron los valores de pendiente, intercepto e intersecto. Con estos valores se calcularon los parámetros cinéticos de tasa limitante de la reacción (Vo), velocidad máxima (Vmax), velocidades aparentes (Vp), concentración del sustrato a la cual Vo es igual a la mitad de la Vmax o constante de Michaelis (Km) y sus valores aparentes para las diferentes concentraciones de inhibidor (Kp) y las constantes de inhibición (Ki). Así, a partir de los resultados generados por el programa es posible determinar el tipo de inhibición que presenta la reacción evaluada, entre los que están comportamientos de inhibición competitiva, no competitiva, acompetitiva y mixto.